导读：金线莲Anoectochilusroxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，其种子自然萌发率和繁殖率低，利用组培技术快速繁殖种苗，对金线莲的开发利用和野生资源保护具有现实意义。。

1 材料与方法

1.1 材料

取金线莲幼嫩茎段为外植体。

1.2 外植体灭菌

取生长健壮且无病虫害的金线莲幼嫩茎段，去叶，放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3-5分钟，然后用自来水冲洗干净，用75%酒精灭菌3-5秒，用0.1%的升汞灭菌15分钟，再用无菌水冲洗5-6次，将消毒好的材料切成有1-2节、带腋芽的茎段，接种在Ar   6-BA 1.0mg/L   NAA0.5mg/L培养基上（Ar为MS改良培养基，大量元素减半，微量元素加倍），pH5.8，蔗糖2%、琼脂粉0.7%。

培养条件：温度（25±1）℃，光照时间8-10小时/天，光照强度1500-2000lx。

1.3 不同激素浓度继代增殖培养基筛选

将分化出的丛生芽分割转接到继代增殖培养基上，培养基Ar   6-BA 1-4mg/L   NAA0.1-0.8mg/L   IBA 0.2mg/L   KT 0.5mg/L，培养基附加糖3%、琼脂粉0.7%，pH5.8。培养条件同上。通过改变6-BA和NAA的浓度，共为7个处理（每个处理接种三瓶，每瓶5个接种块），经继代增殖培养，筛选培养基的最佳培养配方。

1.4 不同添加物壮苗培养基筛选

将幼苗转接到壮苗培养基上，培养基Ar加入或不加入10%马铃薯、10%香蕉等添加物 糖 3%   AC 0.2%；培养基均加入琼脂粉0.7%，pH5.8。培养条件同上。试验设培养基中添加10%马铃薯，添加10%香蕉，添加10%马铃薯 10%香蕉，不添加马铃薯和香蕉（对照）等4种处理，以筛选最佳添加物壮苗培养基配方。

1.5 不同激素浓度对生根的影响

不定芽伸长至3-4厘米时，自基部切下，接种到生根培养基上，培养基为Ar   NAA 0.1-2.0mg/L   IBA 0.2-0.5mg/L   糖3%   AC 0.2%，培养基均加入琼脂粉0.7%，pH5.8，共设8个处理，每处理接种5瓶，每瓶接种5株，培养条件同上，以筛选最佳的生根培养基。

2 结果与分析

2.1 不同激素浓度对不定芽继代增殖的影响

试验结果（表1）：培养15天时，7种处理有的开始分化出不定芽，60天后7个处理中以处理第6组BA 2.0   NAA 0.4   IBA 0.2   KT 0.5为最佳，分化出的不定芽为丛生状，且多达90个小芽，生长粗壮，分化率达100%，增殖倍数6。其次是处理第2组BA 2.0   NAA 0.2   IBA 0.2   KT 0.5，不定芽总数81个，生长粗壮分化率100%，增殖倍数5.4。试验表明，芽的分化和增殖与BA、NAA浓度有密切关系，一定量的BA、NAA对不定芽有促进分化和增殖的作用。

2.2 不同添加物对幼苗生长的影响

培养60天后的观察结果（表2）表明：添加10%马铃薯、香蕉等添加物能显著地促进幼苗的分化、生长，各项分化、生长指标都明显高于对照，其中以添加10%马铃薯和10%香蕉的分化、生长最好；其次为添加10%香蕉和10%马铃薯的，然而污染率也随加入添加物而增加，幼苗分化、生长愈好的，污染愈重。

2.3 生根培养

当幼苗伸长到3-4厘米高时从基部切下，转接到生根培养基上。培养60天后的观察结果（表3）表明：在处理第6组IBA 0.5   NAA 0.5和处理第7组IBA 0.5   NAA 1.0的两种培养基上，12天后开始生根，60天后不定根的生根率达到100%。平均每株苗的根数3.8条或4.0条，不定根平均伸长2.8厘米或3.1厘米，苗生势粗壮，生长最好；而处理第1、5组的生根率分别为87%和93%，不定根少，幼苗生势弱，生长最差。可以看出，一定量的IBA和NAA对不定根的诱导有促进作用。

2.4 移栽

幼苗在生根培养基上培养50-60天，长至5-6厘米时，将瓶苗搬到温室大棚或阴凉通风处经7-10天的适应性炼苗，便可洗苗移栽。栽培基质以森林腐殖土、河沙、珍珠岩按7 : 2 : 1的比例配制，用1%-2%的多菌灵或高锰酸钾液喷淋消毒。将生根苗的培养基洗净，用1%的多菌灵水浸泡10分钟，晾干，移栽于消毒好的基质上，用无纺布保湿10-15天，移栽成活率可达98%以上。

3 讨论

a. 金线莲在继代增殖培养过程中加入一定量的KT可促进芽的分化和增殖。金线莲对6-BA不敏感，当培养基中的6-BA浓度达到4mg/L仍未出现畸形苗，但在培养过程中6-BA有积累效应，应根据苗的生势确定6-BA的用量。对金线莲的组培快繁的基本培养基、外源激素的浓度和添加物等因素的试验表明：Ar   6-BA 2.0   NAA 0.4  IBA 0.2   KT 0.5是适合的继代增殖培养基；Ar   糖 3%   AC 2%的培养基添加10%香蕉和10%马铃薯能显著促进幼苗的分化和生长；Ar   IBA 0.5 NAA 0.5  糖 2%   AC 0.2%是适于生根的培养基。

b. 金线莲炼苗时，对基质要求不严，腐殖土、河沙、珍珠岩等基质，成苗率可达98%以上。但虫害为害严重，主要有毛毛虫、小螺丝、蜗牛啃食叶片或幼嫩茎尖，植株慢慢枯死，因而，炼苗时要注意防虫，或者避开高温高湿季节（虫害高发期）炼苗，每年10月至翌年4月是最佳的炼苗季节。