你的培养基不凝固？琼脂用量和pH值对了吗？

植物组织培养中多数植物pH要求5.0-6.2，琼脂浓度一般选用7-8g/L，最高可达16g/L，较低的5g/L，而我们观察到培养基凝固程度受pH影响较大，适当的降低琼脂浓度不仅可以满足外植体的正常支撑需求，且培养效果更佳。

本文研究pH和琼脂浓度对培养基凝固程度的影响，以确定组织培养技术中合理的琼脂浓度。

实验以MS培养基为基本培养基，用琼脂粉(天津市英博生化试剂有限公司2004年生产)为培养基凝固剂，以Sarlorius分析天平称量，选用MX300多功能测量仪测定pH。

设计的pH有：2.0、4.0、5.0、5.8、6.2、8.0，琼脂浓度：2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0g/L，共36个处理组合。每个处理重复3次。

准确量取各母液并用蒸馏水定容到150mL容量瓶中，然后倒入500mL烧杯中，加入所需要的琼脂，并在电炉上加热，使琼脂全部溶解后，降温至50℃时调节pH，然后分别将150mL培养液分装到3个150mL三角瓶中，置于121℃高压灭菌锅内25分钟，室温下自然凝固后观察。

凝固等级分为：0级-未凝固、1级-轻微晃动培养基即碎裂、2级-轻微晃动培养基不易碎裂、3级-用力晃动培养基易碎裂，4级-用力晃动培养基不碎裂。

试验得到以下结果：

1.     pH为2.0时，2.5-8.0g/L琼脂浓度的培养基凝固等级均为0级；pH为4.0-8.0时，各浓度的培养基凝固等级在一定的琼脂浓度内随浓度增加而增高。在相同琼脂浓度下，凝固等级随pH增加而提高，其中当pH5.0-8.0时，同一浓度下的凝固等级基本相同(表1)。

2、说明pH和琼脂浓度共同影响培养基的凝固等级，pH较低(≤4.0)时，pH是影响凝固等级的主要因素，pH较高(5.0-8.0)时，琼脂浓度是影响凝固等级的主要因素。

1.     培养以沙芥茎尖诱导形成的愈伤组织、大蒜和马铃薯芽的结果显示，在pH5.5-6.2范围内，琼脂浓度为3.0-3.5g/L的B5、1/2B5、MS培养基上，其外植体均生长正常，并未因培养基种类而影响凝固等级(表2)。

据此认为，用凝固等级为2级、3级的培养基即可满足大多数外植体的正常支撑需求。对要求pH为5.0-6.2的植物来说，无论以何种外植体和培养基培养，均可用3.0-4.0g/L的琼脂；要求pH为4.0-5.0的植物可适当提高琼脂浓度。如遇琼脂质量差时，可适当增加用量。