导读：微型月季(Rosahybrida)是月季家族的新品种，为蔷薇科蔷薇属多年生木本，落叶或半落叶常绿灌木。

本实验以黄色新品种微型月季为研究对象，探讨不同外植体对愈伤组织诱导的影响，以及不同配比的植物生长调节剂对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根的影响，建立了高频离体再生体系。本文已筛选出本实验最优组培方法如下。

1 外植体材料

1.1 实验材料

供试材料为黄色微型月季，选取12天叶龄的叶片。

1.2 材料处理

取微型月季枝条在自来水下冲洗干净，用75%乙醇表面消毒30-40秒，再用0.1%升汞溶液灭菌2-6分钟，无菌水冲洗3-5次。在无菌条件下将叶片剪成0.5厘米平方的小块，并露出新鲜伤口。

2 方法

2.1 培养基及培养条件

诱导愈伤组织培养基：MS   6-BA 1.0mg/L   2,4-D 3.0mg/L

不定芽诱导和增殖培养基：MS   6-BA 1.0mg/L   NAA 0.1mg/L   TDZ 0.02mg/L

诱导生根培养基：1/4MS   NAA 0.1mg/L

以上培养基均含蔗糖30g/L和琼脂7g/L，pH5.8-6.2。

培养条件：为温度(25±2)℃，光照16小时/天，光照强度为2000lx-3000lx。

2.2 愈伤组织诱导

选取经处理的外植体接种于诱导愈伤组织培养基上。培养30天，在显微镜下可观察到所诱导出的愈伤组织颜色偏浅黄且比较透亮，呈圆颗粒状，质地饱满。可将该种类型的愈伤组织转移到分化培养基中进行不定芽的诱导。

2.3 不定芽的诱导和增殖

外植体在愈伤组织诱导培养基上培养30天后，挑选长势良好的愈伤组织，接种于不定芽的诱导和增殖培养基中进行不定芽诱导，愈伤组织表面出现绿色芽点，继续培养4-6周后可形成不定芽，诱导率可达92.6%。

2.4 生根诱导

将高1-2厘米且长势良好的再生苗移植到生根培养基上诱导生根，幼苗经过15天的培养便能长出根，生根率为100%。

另外，活性炭对培养基中有害物质具有吸附作用。因此，在诱导生根的过程中加入少量活性炭有利于根的生长。

2.5 移栽炼苗

将再生根生长状况良好的微型月季幼苗取出，用流水缓慢地将根部残留的培养基冲洗干净(注意不要伤及根部)，移栽至土壤中炼苗1-7天。

3 总结

选取微型月季幼嫩离体叶片(叶龄12天)为外植体，以MS为基本培养基，研究不同配比的植物生长调节剂对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根培养的影响。结果表明：

A. 诱导愈伤组织的最佳培养基配比为6-BA 1.0mg/L   2，4-D 3.0mg/L，诱导率为100%;

B. 6-BA在微型月季不定芽诱导中起着关键作用，诱导不定芽产生的植物生长调节剂最适配比为6-BA 1.0mg/L   NAA 0.1mg/L   TDZ 0.02mg/L，愈伤组织再分化率达到92.6%;

C. 生长素对微型月季的生根有重要影响，以1/4MS   NAA 0.1mg/L为生根培养基可获得100%的生根率。

实验最终建立了微型月季组织培养和高频离体再生体系。