导读：非洲紫罗兰（Saintpquliaionantha）又名非洲堇，为双子叶植物纲苦苣苔科非洲紫罗兰属的多年生长常绿草本。

本文以非洲紫罗兰的嫩叶片为外植体，用MS固体培养基为基础，添加不同的生长素和细胞分裂素诱导嫩叶分化愈伤组织，并对诱导不定芽、继代增殖、不定根诱导培养基进行了筛选。为实现大花、重瓣型非洲紫罗兰组织培养商品化生产生产提供技术平台。

1 材料与方法

1.1 供试材料

非洲紫罗兰紫色品种，取自香港紫罗兰有限公司，以非洲紫罗兰上部嫩叶为外植体。

1.2 试验方法

将幼嫩叶片用饱和洗涤液浸泡5-10分钟，自来水冲洗15-20分钟，除去表面污物，沥净水分，超净工作台上用75%的酒精浸润20-30秒，无菌水冲洗1次，再用浓度0.1%的升汞溶液消毒5-6分钟，无菌水冲洗3-5次，充分去除残留的升汞，沥净水分。

将中部幼叶切成0.5-1平方厘米的小块，叶片腹面向上放置，接种在愈伤组织诱导培养基上，置于温度25℃培养室内，光照时间16小时/天，光照强度1500lx。

1.3 培养基

以MS为基本培养基，附加6-BA(0.5，1.0，2.0，3.0mg/L)和NAA(0.1，0.5，1.0mg/L)，共12个不同浓度的组合进行愈伤组织诱导，并对得出的双因子组合共4个处理进行不定芽分化及增殖培养，以1/2MS为基本培养基，附加激素NAA(0.05，0.1，0.5，1.0mg/L)、IBA(0.1，0.5，1.0mg/L)，及6-BA 0.05mg/L   NAA 0.05mg/L共7个处理进行不定根分化培养。

培养基均含3%蔗糖、0.7%琼脂，pH5.8-6.0。

2 结果与分析

2.1 两种激素浓度不同水平组合对叶片外植体愈伤组织形成的影响

外植体接种在分化培养基中，每个处理30瓶，三次重复。接种10天后，部分分化培养基上的叶片从切口处开始膨大，20天后，叶片表面出现褶皱，30天切口处产生少量黄绿色愈伤组织，40天后愈伤组织黄绿色特征明显，并伴有绿色小芽点出现。不同激素水平组合对愈伤组织分化影响较大差异。

随着6-BA浓度的增高，愈伤组织形成明显增多，但当浓度达到3.0mg/L时，愈伤形成减少，甚至没有，6-BA诱导愈伤的最适浓度为1.0-2.0mg/L。低浓度的NAA促进愈伤形成，有利于不定芽诱导。随着[6-BA/NAA]的逐渐增大，芽点分化呈现升高后降低的趋势，当[6-BA/NAA]=4时，芽点分化率最高。由此可以看出，大花、重瓣型非洲紫罗兰的最佳愈伤诱导培养基为MS  6-BA 1.0mg/L   NAA 0.5mg/L。

2.2 两种激素浓度不同水平组合对叶片愈伤组织分化的影响

将愈伤组织切成3-5厘米的小方块接种于分化培养基中进行继代培养，每个处理30瓶，3次重复。培养周期30天，观察芽丛形成情况，继续将分化出的丛生芽继代到分化培养基上培养20天后计算增殖率。

试验结果表2中表明，随着[6-BA/NAA]的逐渐增大，芽丛数逐渐增多，增值率提高，当[6-BA/NAA]=10时，芽丛数最多，以后芽数及增值率开始有降低趋势，愈伤组织分化过程中芽多以芽点状存在。继代培养后期发现[6-BA/NAA]=2、4时，芽丛粗壮、嫩绿，成苗率较高；[6-BA/NAA]=10时，芽丛较高，叶片卷曲、黄绿色较多、有大量畸形苗；当[6-BA/NAA]=20时，芽丛长势细弱、叶片卷曲、黄绿色、部分叶片呈水渍状，玻璃化现象明显，成苗率较低。芽分化及增殖培养的最适培养基为MS   6-BA 2.0mg/L   NAA 0.5mg/L。

2.3 不同激素浓度对不定根分化的影响

不同培养基和激素浓度对生根有不同的影响，早有报道6-BA对非洲紫罗兰生根有抑制作用。将3-4厘米左右生长健壮的的试管苗移至生根培养基中，每个处理30瓶，每瓶接种5株，培养25天后，统计生根率及须根生长情况。

从表3中可以看出，随着NAA浓度的增加，生根率逐渐降低，长势变弱；IBA也有相同趋势。培养中发现，紫罗兰根系整体较细、多为须根，长度在1-1.5厘米左右。因此最适生根培养基为1/2MS  NAA 0.1mg/L或IBA 0.1mg/L。

为了尝试小苗是否能在增殖的同时生根，从而节省从生长到移苗的时间，在继代增殖过程中，将小苗接种到一次生根培养基1/2MS   6-BA 0.05mg/L   NAA0.05mg/L上，培养45天后调查发现，供试的150株瓶苗，小苗生长健壮，叶色嫩绿，其中96株有大量根系分化，但是根系偏红色，长度约1厘米左右，此方法有待于进一步研究，以缩减规模化生产工作量。

3 小结

利用组织培养技术对大花、重瓣型非洲紫罗兰进行快繁，可以使繁殖系数增至几千倍，为花卉市场及大规模生产解决种源问题。

本试验研究结果表明：大花、重瓣型非洲紫罗兰以嫩叶为外植体，愈伤组织分化培养基为MS   6-BA 1.0mg/L   NAA 0.5mg/L，出愈率可达37%；不定芽分化及继代增殖的适宜培养基为MS   6-BA 2.0mg/L   NAA 0.5mg/L时芽分化数量最多，增殖率达6.8倍，成苗率可达85.6%，试管苗质量好；诱导生根培养基1/2MS   NAA 0.1mg/L或IBA 0.1mg/L，生根率可达93.7%以上，根生长势旺、健壮。

有资料表明，非洲紫罗兰可在MS  6-BA 0.1mg/L   NAA 0.1mg/L的配方中一次成苗，本试验采用一次性生根培养基1/2MS   6-BA 0.05mg/L   NAA 0.05mg/L进行一次生根试验，生根率较高，试管苗长势好，但是生根时间较长，根系偏红色，有待于进一步研究。