组培室操作标准

一 生产环境 

1 工作人员进入组培室必须更换工作服、换组培室内专用拖鞋，接种人员还要带帽、带口罩。

2 所有人员在组培室内不准高声喧哗、打闹。

 3工作期间，各生产房间要关闭房门，尤其是接种间；工作人员出入要随手关门。

4 各种生产用品要安固定的位置排放整齐，利于操作使用方便，不可乱拿乱放。

5 工作过程中所产生的垃圾要及时清理，尤其是接种间，其内垃圾停留时间不得超过4小时。

6 整个操作过程中所使用的器皿、工具等做好保洁；操作环境保持整洁，需要消毒的工具、台面、器皿及时消毒。

二 接种程序

1. 准备工作：接种人员在正式接种之前要做好准备工作，包括准备酒精灯、消毒剂、灭菌用脱脂棉、纱布以及准备接种工具、分取培养基、接种用苗和工作台灭菌等。

 ·酒精灯用工业酒精作燃料，而非75%酒精。

 ·工作台上消毒用酒精浓度为75%。

 ·工作台灭菌：

  1、上台前用紫外灯照射30分钟，2、正式接种前再用75%酒精仔细擦一遍。

·培养瓶的取放：从操作车上取出培养瓶，一定要注意，手不能接触培养瓶的边沿，同时要尽可能减少与培养瓶的接触面，一般用手掌托住培养瓶底部，不与瓶口接触。

·接种工具灭菌：1、用灭菌布包裹好，在高压锅里灭一次，这一步由灭菌人员负责完成；2、在工具灭菌之前，工作人员的手部，包括手腕，都要用酒精仔细擦拭一遍。3、在工作台上，操作人员从布包里取出后，先用酒精擦拭一下，再放在酒精灯火焰上灼烤一遍，其要求是工具的每一点在火焰上灼烤时间不得少于5秒钟。

2 接（转）苗：

 ·取苗：先解开培养瓶的瓶盖，把瓶口在酒精灯上烤7～10秒，把瓶盖对着风源，放在酒精灯边上。将种苗瓶放在瓶架上。

 ·接苗：培养瓶盖的放置方法和及瓶口灼烤方法与取苗时的相同，烤完瓶口后，再接苗；接苗时，镊子最好不要与瓶口接触，一瓶内一般接13～15棵苗，不要接得过多过少，所接苗不可整丛接入或株苗带有整块未分化完全的球茎，必须单株接入；组培苗接在瓶内要均匀、整齐、直立。

 ·封口、记录：接完种后瓶盖及时盖紧，其松紧度以用手转不动为准；下台前要把品种代号、培养基类型、个人编号以及接种日期标示到瓶上。

·接种结束：工作台收拾干净，把接种过程中产生的垃圾清理掉，台上的物品也要摆放整齐，擦拭干净。

三 组培苗的管理

 1.瓶苗要整齐的摆放在规定组培架上，不可乱放。

 2.接种人员每天都要统计自己的接种数量，包括转前瓶数和转后瓶数。

 3.管理人员要定时开灯、关灯，保证组培苗有足够的光照时间，但也不可过长，以每天14小时左右为宜。

4.管理人员及时检测空调的运行情况，检测培养室内温度，出现情况及时解决；培养室内每间放置水桶增加室内空气湿度，及时添加水。

四 接种用具的清洗

 1.洗刷培养瓶、培养皿：第一步：把培养瓶培养皿放入洗洁净溶液里，先用毛刷清洗内部，再用钢丝球把外面的标记字清洗掉。第二步：把他们再用清水冲洗3-5遍。第三步：把瓶内的积水倒掉，倒放在准备台，准备台上要先放一层纱布。清洁标准：凉干的瓶壁内外无明显的斑点、污迹。

 2.洗涮镊子：用洗洁精浸泡五分钟，用钢丝球打磨一下然后放入清水冲洗三遍。

 3.灭菌器内玻璃珠：每周清洗一次，清洗时加洗洁精搓洗，无明显黑渍后清水冲洗干净，放置在器皿内，自然晾干后继续使用；应每台灭菌器备两批玻璃珠调用。

五 灭菌

 1.对污染苗灭菌：一经发现就随即灭菌处理，大量的进行高压灭菌，少量的加入工业酒精在室外进行处理。

 2.室内空气灭菌：每四周用高锰酸钾和甲醛对室内空气灭一次菌。

 3.室内地面：每２－３天用新洁尔灭拖一遍地。

 4.卧式和手提式高压灭菌锅使用程序：严格按使用说明书操作。