草莓脱毒苗生产技术规范

　　前言

　　为认真贯彻福建省强制性地方标准草莓脱毒苗质量标准，指导我省草莓脱毒苗生产，提高草莓苗的质量，特制定本标准。

 　本标准于2001年6月26日首次发布。

 　本标准由福建省质量技术监督局提出。

  本标准由福建省农科院生物技术中心负责起草。

　　本标准主要起草人：宋亚娜、周莉娟、姜秀勇、郑伟文。

　　1范围

　　本标准规定了草莓脱毒苗生产过程中的定义、培育技术和病毒检测等技术要求。

　　本标准适用于通过组织培养技术培育的不带草莓斑驳病毒(S.oV)、草莓轻型黄边病毒(SMYEV)、革莓镶脉病毒(SVBV)和草莓皱缩病毒(SCrV)的草莓脱毒苗的生产。

　　2引用标准

　　下列标准所包含的条文，通过在本标准中的引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

 　　DB35/T130.2-2001《草莓脱毒苗质量标准》

　　3定义

　　本标准采用下列定义。

 　草莓脱毒苗

 　经过组织培养脱毒处理或直接引进，经检测后确认不带指定病毒的种苗。

 　4脱毒苗培育技术

 　4.1脱毒组培瓶苗的培育技术

 　4.1.1优良品种选择

 　选择适宜当地栽培的高产优质品种进行脱毒。

 　4.1.2草莓脱毒的主要方法

 　4.1.2.1茎尖组织培养法

 　4.1.2.1.1外植体选择

  选择无病虫、品种纯正的健壮植株，切取带生长点的茎段3cm～4cm，用流水冲洗干净。

 　4.1.2.1.2茎尖剥离

 将表面清洗过的材料置于超净工作台上，用70%酒精表面消毒30s，再用0.1%升汞消毒5min～10min，并不断搅动：然后用无菌水冲洗3次～5次，去鳞片，在解剖镜下用针挑取0.2mm～0.3mm的茎尖，立即接种于茎尖分化培养基中。

 4.1.2.1.3培养条件

 草莓茎尖培养所需要温度为23℃～28℃，光照强度为1000Lx～3000Lx，每天光照12h～16h。诱导培养2～3个月，待丛生芽形成后转入增殖培养基。

 4.1.2.1.4组织培养快繁

 将在茎尖分化培养基础上诱导分化的第一代丛生芽进行病毒检测，合格的试管苗在增殖培养基上增殖，增殖培养每20d～30d继代一次(总继代次数不超过10代)，选2cm～3cm的小苗转入生根培养基，经过20d～30d生根培养，形成完整植株的组培苗出售给生产单位或个人；不合格的试管苗全部销毁。

　　4.1.2.2花药组织培养法

 　4.1.2.2.1外植体选择

　　摘取花萼未张开花粉母细胞处于单核期的花蕾，放入4℃冰箱中预处理1d～2d。

 　4.1.2.2.2培养过程

 　取预处理过的花蕾，在无菌条件下用70%酒精浸泡20s，再用0.1%升汞消毒5min～8min，并不断搅动，无菌水冲洗3次～5次，然后在无菌条件下中去除花萼、花托等，用镊子挟取黄色花药立即接种于愈伤组织诱导培养基中。

 　4.1.2.2.3培养条件

　　愈伤组织培养进行暗培养，培养温度为23℃～28℃。

　　4.1.2.2.4组织培养快繁

　　愈伤组织诱导培养2～3个月后，将0.2c，m大小的愈伤组织转入分化培养基中诱导丛芽分化，待分化成茁后，进行病毒检测，对合格的试管苗进行增殖，增殖培养每20d130d继代一次(总继代次数不超过lO代)，选2cm～3cm的小苗转入生根培养基，经过20d～30d生根培养，形成完整植株的组培苗出售给生产单位或个人；不合格的试管苗全部销毁。

　　4.2隔离快繁培育技术

　　隔离快繁培育技术包括脱毒原原种苗繁殖、脱毒原种苗繁殖和脱毒生产用苗繁殖。

　　4.2.1脱毒原原种苗繁殖

　　经过病毒检测的脱毒组培苗移栽成活的植株为脱毒原原种苗。脱毒原原种苗每年应进行一次病毒检测，发现问题即汰除。检测机构要将病毒检测结果报告有关部门。

　　4.2.2脱毒原种苗繁殖

　　由脱毒原原种苗定植于无土壤线虫、无革莓病源和防虫隔离区内，分株繁殖的第一代植株为脱毒原种苗。脱毒原种苗接受病毒检测机构的定期病毒检测，一旦发现问题立即更换。

　　4.2.3脱毒生产用苗繁殖

　　由脱毒原种苗定植于无土壤线虫、无草莓病源和防虫隔离区内，分株繁殖后代为脱毒生产用苗。脱毒生产用苗接受病毒检测机构的定期病毒检测，一旦发现问题立即更换。脱毒生产用苗直接提供给生产单位或个人。

 　5病毒检测

 　5.1病毒种类

　　在我省危害草莓的病毒种类主要有四种，分别为草莓斑驳病毒(SMoV)、草莓轻型黄边病毒(SMYEV)、草莓镶脉病毒(SVBV)和草莓皱缩病毒(SCrV)。

 　5.2检测方法

 　　草莓脱毒苗的检测按DB35/T130.2.2001《草莓脱毒苗质量标准》第5章执行