甘薯脱毒的组织培养

1.材料选择和消毒

选择适宜当地栽培的高产、优质或特殊用途的生长健壮的甘薯品种植株作为母株，取枝条，剪去叶片后切成带1个腋芽或顶芽的若干个小段。剪切好的茎段用自来水流水冲洗数分钟后，用70%酒精处理10s，再用0.1%升汞消毒10min，然后用无菌水冲洗4～5次，或用2%次氯酸钠溶液消毒5min，最后用无菌水冲洗3～4次。

2.茎尖剥离和培养

把消毒好的材料放在解剖镜下，用解剖刀剥去顶芽或腋芽上较大的幼芽，切取0.3～0.5mm，带有1～2个叶原基的茎尖分生组织，并迅速接种到制备好的培养基上。甘薯茎尖培养较理想是培养基为MS IAA0.1～0.2mg/L BA0.1～0.2mg/L 蔗糖30g/L，若再加入GA3 0.05mg/L对茎尖生长和成苗有促进作用。培养基pH值为5.6～6.0。培养条件：温度25～28℃，光照1500～2000lx，14h/d。

不同品种的茎尖生长有差异，一般培养10d左右茎尖膨大并转绿，20d左右茎尖形成2～3mm的小芽点，且在基部逐渐形成黄绿色的愈伤组织。此时应将培养物转入无激素的MS培养基上，以阻止愈伤组织的继续生长，使小芽生长和生根。芽点基部少量的愈伤组织对茎尖生长和成苗有促进作用，但愈伤组织过度生长对成苗则非常不利，有明显的抑制作用。

3.病毒检测

生产上甘薯病毒检测的常用方法有目测法和指示鉴定法。

甘薯病毒为系统感染，薯苗薯块均可带病。薯叶上的主要症状有花叶、皱缩、明脉、脉带、紫色斑、枯斑、卷叶等。薯块剖面可见黄褐斑块。甘薯病毒症状受病毒种类、甘薯品种、生长阶段、环境条件等诸多因素影响而复杂多变，并有隐性症状，因此根据症状只能做初步诊断。

常用甘薯病毒坚定的指示植物有巴西牵牛，该植物对甘薯的多种病毒敏感，受病毒侵染后叶片上易产生系统病状。可用汁液抹法或嫁接法进行检测。

4.脱毒苗扩繁和种薯的生产

通过病毒检测的脱毒苗先在试管内进行切段快繁。当试管苗长至3~6cm时，将小苗进行切段作短枝扦插，除顶芽一般带1~2片展叶外，其余切成1节1叶的茎段。切下的茎段立即转接入无激素的MS培养基上，培养条件与茎尖培养相同。一般2~3d后切段基部产生不定根，30d左右长成有6~8片展叶的试管苗。

待试管苗繁殖带一定数量后，即可在防虫条件下于无菌基质中进行栽培繁殖。在防虫温室或网室内的无病毒土壤上栽种脱毒苗，所结小薯即为原原种薯，育出的薯苗为原原种苗。甘薯剪秧扦插，每10d即可剪苗一次，以苗繁苗的方法更有利迅速扩繁。

以原原种（苗）为种植材料，在防虫条件下无病毒土壤上培育出的薯块即为原种。以原种苗在大田条件下生产所结薯块即为生产用种薯（良种）。种薯生产可分为不同等级，一级种薯的生产要求在隔离的地块上栽培原种，地块四周500m范围以内不栽同种植物，并要求注意及时防虫治病。二、三级种薯生产地块要求的条件可适当降低，种薯每种一年降一级。脱毒种薯、种苗用于生产，增产效果一般可维持2~3年，其后就应更换新的脱毒种苗、种薯。