组培过程中琼脂粉不凝固的原因分析

  生物组培室每天要配50-100升蓝莓培养基或白芨培养基。如果配了一天的培养基，灭菌出来却不凝固或偏软，这是我们最不希望看到的结果。木木组培室将这些年来遇到的问题做一个总结，希望能对遇到类似问题的你有所帮助。所配培养基要求的PH越低，出现的问题越多，木木组培室几乎90%的问题都出现在蓝莓培养基上。在总结问题之前，很有必要说明一下我们的配置流程，我们用50升的灌装机，基本步骤是所有成分加好，定容，测PH，一边搅拌一边加热煮沸，灌装，高压灭菌。我们是热灌装。个人认为冷灌装的问题会比热灌装要多些。

 第一大类

不凝固？汤一样？这种情况很少见，不过我们也遇到过。

 1. 组培室刚运营的时候，工作人员经验不足，  琼脂粉忘加了。

 2. 琼脂添加的量算错了，少加了。

 这两个原因容易出现在新手身上。

 3. PH误差较大，差1以上; 忘记调节PH。这种  情况很容易造成蓝莓培养基出现不凝固，白芨培养基会偏软。平常PH计会因为各种你想像不到的原因出现偏差，所以需要定期校准。

 第二大类

偏软？明明希望能像果冻，却煮成一锅粥？

 1. 琼脂用量问题。

琼脂用量的差异主要出现在不同强度和不同批次的琼脂粉上。所以每次更换琼脂必须要做好测试工作，必须！！！

 2. PH问题。

平时要多留心在正常情况下，灭菌后的培养基PH值与所调节的PH相比下降了多少。比如我们实验室，冬天一般会下降0.2-0.3个PH，夏天则会下降0.3-0.4，不同灭菌锅之间也会有差异。

  一旦培养基出现问题，我们最关心的是灭菌后的培养基PH值！！！所以我们组培室如果配的培养基凝固的不好，第一时间会校准PH计，再测量那些有问题的。

  通过校准PH计，检查仪器是否准确。大多数情况下仪器会有偏差，这是导致蓝莓培养基凝固不好的一个原因。但较少的偏差对白芨培养基影响不大。

 3. 琼脂过度水解问题。

    PH计没问题，再测量偏软培养基的PH值。绝大部分会PH偏低。琼脂的水解比例加大，有效琼脂含量下降，导致凝固性能下降！木木组培室之前发生过一个情况，反复确认PH计没问题，加大琼脂用量，依然不凝固，最后发现灭菌锅出问题了，实际温度比显示的温度要高很多度，导致培养基过度灭菌了，琼脂水解量加大，结果就不凝固。甚至有时候排冷气的时间加长，或者灭菌结束后闷在锅里一段时间，或者灭菌后的培养基放在太热的空调房里，冷凝时间加长等等，都会造成琼脂的水解。

   在同等PH和灭菌条件下，部分琼脂会水解的厉害一些，前后会下降0.4-0.5个PH，针对这类琼脂，我们会在调节PH时比平时高0.2左右，灭菌出来的PH就会跟平常所灭的培养基一样，凝固也会好很多。。

还有一种情况会造成琼脂损失，培养基加热过程中搅拌不到位，粘锅了，致使培养基颜色加深，往往凝固也不好。